具体细胞的培养过程！

培养皿一直以来是细胞的培养场所，只要使用得当，就能够起到非常好的作用。作为一个培养皿厂家，今天小编就来和大家聊一聊具体细胞的培养过程吧。

首先是贴壁细胞传代流程。细胞培养一定要保持工作区的无菌清洁，先用紫外灯和臭氧杀菌1h，然后通风30min，操作前需要换细胞间专用拖鞋，双手带上一次性橡胶手套并用75%乙醇消毒，穿上实验服，戴上一次性口罩和帽子，整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。

在具体实施过程中，首先要取对数生长期的贴壁细胞，弃掉旧培养基。用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞1-2遍。 (每10 cm2 培养表面积需要2 ml 溶液)。从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液，以避免搅动细胞层，前后摇晃容器数次。冲洗步骤可去除可能抑制消化酶作用的少量血清、钙和镁。

再者，从培养容器中吸出冲洗液并丢弃。向培养瓶中加入预热的消化酶；试剂量应足以覆盖细胞层  (每10 cm2 大约0.5ml)。轻轻摇晃容器，使试剂完全覆盖细胞层。将培养容器在室温下孵育约2分钟。

我们要知道在显微镜下观察细胞解离情况。如果解离程度未达90%，可将孵育时间延长几分钟，每30秒钟检查一次解离情况。也可轻轻拍打培养容器以加快细胞解离。细胞解离程度大于等于90%时，倾斜培养容器，使细胞上液体尽快流尽。加入所用消化酶两倍体积的预热完全生长培养基。轻柔吹打细胞层表面数次，使细胞分散，成为单细胞悬液。将细胞转移到 15ml 离心管中，200g 离心5至10分钟。用较少体积的预热完全生长培养基重新悬浮细胞沉淀。

然后将细胞悬液稀释到该细胞系推荐的接种密度，并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中，把细胞放回培养箱。如果使用培养瓶，将其放入培养箱前应将瓶盖旋松，以便进行充分的气体交换，除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶盖。

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